1.Čo je bunková kultúra?
Bunková kultúra znamená odstraňovanie buniek zo zvierat alebo rastlín a ich pestovanie v priaznivom umelom prostredí.Bunky môžu byť odobraté priamo z tkaniva a pred kultiváciou rozložené enzymatickými alebo mechanickými prostriedkami, alebo môžu byť odvodené zo zavedených bunkových línií alebo bunkových línií.
2.Čo je primárna kultúra?
Primárna kultúra označuje štádium kultivácie po oddelení buniek od tkaniva a proliferácii za vhodných podmienok, kým neobsadia všetky dostupné substráty (to znamená, že nedosiahnu konfluenciu).V tomto štádiu musia byť bunky subkultivované prenesením do novej nádoby s čerstvým rastovým médiom, aby sa poskytol väčší priestor pre pokračujúci rast.
2.1 Bunková línia
Po prvej subkultúre sa primárna kultúra nazýva bunková línia alebo subklon.Bunkové línie odvodené z primárnych kultúr majú obmedzenú životnosť (tj sú obmedzené; pozri nižšie) a ako prechádzajú, dominujú bunky s najvyššou rastovou kapacitou, čo vedie k určitému stupňu genotypu v populácii konzistentného s fenotypom.
2.2 Bunkový kmeň
Ak sa subpopulácia bunkovej línie pozitívne vyberie z kultúry klonovaním alebo nejakým iným spôsobom, bunková línia sa stane bunkovým kmeňom.Bunkové kmene zvyčajne získavajú ďalšie genetické zmeny po začiatku rodičovskej línie.
3. Obmedzené a kontinuálne bunkové línie
Normálne bunky sa zvyčajne delia len obmedzený počet krát, kým stratia schopnosť proliferovať.Toto je geneticky podmienená udalosť nazývaná starnutie;tieto bunkové línie sa nazývajú konečné bunkové línie.Niektoré bunkové línie sa však stávajú nesmrteľnými procesom nazývaným transformácia, ktorý môže nastať spontánne alebo môže byť vyvolaný chemikáliami alebo vírusmi.Keď konečná bunková línia prejde transformáciou a získa schopnosť neobmedzeného delenia, stane sa kontinuálnou bunkovou líniou.
4. Stav kultúry
Kultivačné podmienky každého typu buniek sú veľmi odlišné, ale umelé prostredie pre kultiváciu buniek je vždy zložené z vhodnej nádoby, ktorá obsahuje:
4.1 Substrát alebo kultivačné médium, ktoré poskytuje základné živiny (aminokyseliny, sacharidy, vitamíny, minerály)
4.2 Rastové faktory
4.3 Hormóny
4.4 Plyny (O2, CO2)
4.5 Regulované fyzikálne a chemické prostredie (pH, osmotický tlak, teplota)
Väčšina buniek je závislá od ukotvenia a musí sa kultivovať na pevnom alebo polotuhom substráte (adherentná alebo monovrstvová kultúra), zatiaľ čo iné bunky môžu rásť plávajúce v médiu (suspenzná kultúra).
5.Kryoprezervácia
Ak je v subkultúre nadbytok buniek, mali by byť ošetrené vhodným ochranným činidlom (ako je DMSO alebo glycerol) a skladované pri teplote nižšej ako -130 °C (kryokonzervácia), kým nie sú potrebné.Viac informácií o subkultúre a kryokonzervácii buniek.
6. Morfológia buniek v kultúre
Bunky v kultúre možno rozdeliť do troch základných kategórií na základe ich tvaru a vzhľadu (tj morfológie).
6.1 Fibroblastové bunky sú bipolárne alebo multipolárne, majú predĺžený tvar a rastú pripojené k substrátu.
6.2 Bunky podobné epitelu sú polygonálne, majú pravidelnejšiu veľkosť a sú pripojené k matrici v samostatných listoch.
6.3 Bunky podobné lymfoblastom sú sférické a zvyčajne rastú v suspenzii bez toho, aby sa prichytili k povrchu.
7.Aplikácia bunkovej kultúry
Bunková kultúra je jedným z hlavných nástrojov používaných v bunkovej a molekulárnej biológii.Poskytuje vynikajúci modelový systém na štúdium normálnej fyziológie a biochémie buniek (ako je metabolický výskum, starnutie), účinkov liekov a toxických zlúčenín na bunky a mutagenézy a karcinogénnych účinkov.Používa sa tiež na skríning a vývoj liekov a vo veľkom meradle na výrobu biologických zlúčenín (ako sú vakcíny, terapeutické proteíny).Hlavnou výhodou použitia bunkovej kultúry pre ktorúkoľvek z týchto aplikácií je konzistentnosť a reprodukovateľnosť výsledkov, ktoré možno získať s použitím dávky klonovaných buniek.
Čas odoslania: Jún-03-2019